6 reactivos útiles para el marcaje de proteínas

El marcaje de proteínas es una técnica muy común y de mucha utilidad en biología molecular. A través del uso de estos reactivos pueden diferenciarse las proteínas para luego poder observarlas mediante técnicas espectroscópicas y microscópicas, separarlas por cromatografía o transfectarlas en un embrión y estudiar procesos de diferenciación celular, entre otras aplicaciones que tienen los marcadores de proteínas en las investigaciones científicas. El marcaje de proteínas se puede realizar por algún grupo unido a estas, por ejemplo un grupo fosfato, por un residuo de aminoácidos o sim7 por su peso molecular, de acuerdo a la necesidad del estudio que se esté llevando a cabo.

La compañía Wako cuenta en su catálogo con numerosos reactivos para laboratorio usados en investigaciones en el campo de la biología molecular, en este artículo trataremos el uso de algunos de estos reactivos que sirven como marcadores de proteínas.

Marcador de Proteínas de bajo rango de peso molecular (Molecular Weight Marker, Low Range (3.5 - 42 kDa))

El marcador de proteínas de bajo peso molecular que aparece en el catálogo de Wako funciona para proteínas entre 3,5 y 42 kDa. Este puede utilizarse en estudios de identificación de nuevas proteínas o péptidos relacionados con enfermedades, permitiendo monitorizar la separación de las proteínas de bajo peso molecular del resto de proteínas. También para la separación de proteínas y su posterior caracterización y purificación mediante técnicas estandarizadas. Además de este marcador se pueden comprar el de peso molecular medio (Molecular Weight Marker, Middle Range (14 - 79 kDa)) y el de amplio rango (Molecular Weight Marker, Wide Range (6.5 - 180 kDa)).

Vector pCAG-Ble marcado por un grupo carbonilo (pCAG-Ble TARGET tag-C)

El pCAG-Ble es un vector de expresión para proteínas de fusión, en este caso para el estudio de la bleomicina, antibiótico peptídico de origen natural que se usa como fármaco anticancerígeno. Haciendo uso de este vector de expresión transitoria se logra el marcaje de células que contengan los genes para la expresión de la proteína de formación de la bleomicina.

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pTagBFP-actin

PtagBFP-actin es un vector de expresión de la actina marcada con proteína fluorescente azul. Este vector puede ser usado para el marcaje fluorescente de actina en células vivas. La actina humana que se encuentra en el citoplasma se une por el carbono terminal de la TagBFP. La actina es una familia de proteínas que han variado poco con la evolución y son una parte importante de todas las células eucariotas. La actina tiene entre sus funciones la de ser hidrolasa del ATP. Es una proteína muy usada en todas las investigaciones del campo de la genética y el vector PtagBFP-actin puede usarse en experimentos de transfecciones en células de mamíferos que requieran la expresión de la actina. Además se ha comprobado que puede propagarse en diferentes líneas celulares de E. coli como son DH5alpha, HB101 y XL1-Blue.

pmKate2-vimentin

El pmKate2-vimentin es un vector de expresión de vimentina, proteína usada en investigaciones relacionadas con tumores, células madre y otras muchas aplicaciones, por ser un constituyente fundamental del citoesqueleto de las células. El gen que codifica para vimentina se utiliza como marcador del cáncer de colon, del adenoma de esófago y otros tumores. En este caso el codón mKate2 está optimizado para su expresión en células de mamíferos, por lo que puede ser aplicado para transfecciones en E. coli y en muchas líneas celulares de mamíferos con las que se trabajan en inmunohistoquímica. La proteína mKate2 fluoresce en el rojo lejano con gran eficiencia y su banda es fácilmente distinguible de la fluorescencia base, tiene baja citotoxicidad y es estable frente a los cambios de pH y la incidencia de la luz. Este marcador puede ser usado con la proteína verde fluorescente sin que ocurra solapamiento de las bandas, por lo que en investigación se utiliza cuando en un mismo experimento se quieren observar dos señales de emisión a la misma vez, procedentes de diferentes proteínas.

Wako en su catálogo cuenta con vectores de expresión de diferentes proteínas como son la actina, la queratina y la anexina, marcadas con mKate2.

Acrilamida Phos-tag™

La acrilamida Phos-tag™ permite el marcaje y separación de las proteínas fosforiladas en los residuos de treonina, tirosina y serina. Esta es una poderosa herramienta para realizar análisis de de proteínas por electroforesis, como si fuese el método convencional de conventional SDS-PAGE (electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio), pero logrando una separación más eficiente de las proteínas gracias a la unión de los grupos fosfatos al reactivo acrilamida Phos-tag™. En este caso las proteínas se logran separar dependiendo del grado de fosforilación que tenga cada una, por lo que la acrilamida Phos-tag™ puede ser usada por ejemplo en investigaciones relacionadas con mecanismos de hiperfosforilación.

WIDE-VIEW TM Prestained Protein Size Marker

Este marcador usado en electroforesis permite el marcaje de proteínas recombinantes según su tamaño. De esta forma es posible comprobar la eficiencia de la separación o de procesos de transferencia.

REACTIVOS PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR:

GoldMAN™	Target mRNA Cloning Kit Wako	Tag FP