Uso de productos Wakogel en cromatografía líquida de fase inversa

La cromatografía líquida es una técnica usada para separar compuestos químicos mediante el uso de un soporte sólido donde se impregna la muestra, llamado fase estacionaria, y que es eluido con un disolvente líquido llamado fase móvil. Existen variados diseños en los que se puede aplicar esta técnica: la cromatografía de papel cuando la fase estacionaria es un papel; la cromatografía de capa fina conocida como TLC por sus siglas en inglés (Thin Layer Chromatography) donde la fase estacionaria se fija sobre una placa metálica o de vidrio y posteriormente se eluye con un disolvente apropiado; y la cromatografía de columna. La cromatografía de columna a su vez puede realizarse bajo diferentes condiciones y es uno de los métodos más utilizados por los investigadores en las separaciones de compuestos químicos.

La cromatografía de columna se puede llevar a cabo bajo presión atmosférica o a más altas presiones, donde se utiliza una fase estacionaria con tamaño de partícula muy pequeño, de aquí la necesidad de aplicar una determinada presión para que el eluyente pase a una velocidad adecuada por la fase estacionaria. Dependiendo del tipo de sílica usada en la columna y de las necesidades del investigador se puede aplicar una presión moderada usando una bomba de vacío, método llamado cromatografía flash, o una presión aún mayor. Esta última técnica es la conocida popularmente como HPLC, por las siglas del inglés “High Performance Liquid Chromatography” o cromatografía de alta presión, que sería la cromatografía líquida de alta resolución, pues a menor tamaño de partícula de la fase estacionaria se consigue una mayor separación de los componentes de una muestra. También las cromatografías se clasifican según el tipo de interacción que exista entre la fase estacionaria y los analitos, así tendremos:

• la cromatografía de intercambio iónico: donde la fase estacionaria está cargada con iones que se intercambian con los iones del mismo signo de la muestra, estos soportes se denominan resinas de intercambio iónico y son muy útiles por ejemplo en la purificación de complejos metálicos.

• la cromatografía de adsorción: se utiliza un sólido adsorvente como fase estacionaria de donde son desorvidos los compuestos con la fase móvil.

• la cromatografía de exclusión por tamaño se basa en el uso de una fase estacionaria con un tamaño de poro bien definido, la mezcla a separar está compuesta por moléculas donde la diferencia de tamaño sea considerable, por ejemplo una proteína y reactivos usados en una reacción química de derivatización de esta proteína, es estos casos las moléculas de menor tamaño caben en los poros y se eluyen con menor facilidad que las moléculas grandes.

• la cromatografía de partición o reparto: es la técnica cromatográfica más común y se caracteriza por la utilización de sólidos activados como fase estacionaria, que suelen ser sílica o alúmina previamente unidad a moléculas que provocan su polarización. La cromatografía de reparto de lleva a cabo impregnado el soporte con la fase móvil y posteriormente es añadida la muestra. Cuando es eluida la columna los componentes de la mezcla se separan según su polaridad. En la mayoría de los casos se utiliza una fase estacionaria de alta polaridad que es eluida con un disolvente de baja polaridad, por lo que las moléculas más polares se quedarán más retenidas en el soporte y las menos polares son las primeras en eluir de la columna, a esta modalidad se le conoce como cromatografía líquida de fase normal. En los casos en los que se utiliza como fase estacionaria un sólido unido a moléculas poco polares se invierte la polaridad y entonces se usa como eluyente un líquido polar como puede ser el agua, a este tipo de cromatografía se le denomina de fase inversa o reversa (por el término usado en inglés reversed).

La cromatografía de fase inversa es muy útil cuando se necesita purificar un compuesto de polaridad elevada, ya que se consigue eluirlo con un mejor rendimiento y mayor pureza que si se utiliza la cromatografía de fase normal que en la mayoría de los casos lo que hace es retener el compuesto en el soporte y dificultar su separación o purificación. Al ser un método menos utilizado a los investigadores en muchas ocasiones se les dificulta encontrar los materiales adecuados para realizar cromatografías líquidas de fase inversa, para ello Wako tiene la línea de productos Wakogel® que comentaremos a continuación. Esta línea de productos está constituida por varios tipos de sílicas que han sido activadas con agentes sililantes hidrofóbicos para que puedan ser utilizadas como fase estacionaria en cromatografías en fase inversa.

Los productos de la Serie Wakogel® B son geles de sílice para extender sobre las placas de TLC, caracterizados por contener el radical octadecilo unido a la sílica.

La serie Wakogel® LP es llamada de esta forma por ser sílicas apropiadas para columnas de baja presión (LP: low pressure), estos productos contienen partículas que van desde los 10 hasta los 60μm.

La serie Wakogel® C está formada por sílicas con un mayor rango de tamaño de partículas desde 5 hasta 425 μm y son aptas para utilizar en columnas abiertas, de baja presión y en cromatografía flash. Para esta última técnica están disponibles también las sílicas de la serie Wakogel® FC, específicas para ser utilizadas en este tipo de columnas y donde se destaca la Wakogel® FC-40FM que contiene una mezcla de moléculas fluorescentes.

Por su parte la serie Wakogel® C18 se caracteriza por contener partículas unidas a cadenas de 18 carbonos que pueden ser activadas porteriormente con ácidos, aminas u otras sustancias según se precise para una buena separación de los analitos. Estas sílices también son aptas para cromatografía flash.

La serie Wakogel® Q está diseñada para separar, analizar y purificar productos petroquímicos. Estas son algunas de las muchas sílicas que los investigadores pueden encontrar en los catálogos de la compañía Wako.

Contáctenos si está interesado en algunos de los reactivos de laboratorio de química mencionado en este artículo.

Bibliografía:

1) K. Helrich (Editor). Official Methods of the Association of Official Analytical Chemistry (AOAC Official Methods of Analysis), 15 th. Ed., Vol. 2, (1990).

2) Dong, M.W., Modern HPLC for Practicing Scientists. John Wiley and Sons, New York, 2006.

ALGUNOS REACTIVOS PARA LABORATORIO:

Agosterol A	Bambanker™	Conejo Anti IBA-1