Reactivos útiles para aclarar tejidos

Los tejidos de animales y plantas tienen color y en muchos casos autofluorescencia. Cuando se realizan estudios mediante técnicas microscópicas, el color o la fluorescencia de los tejidos puede ocasionar interferencia o impedir que se obtengan resultados. En estos casos se utilizan reactivos para aclarar tejidos.

Desde finales del siglo pasado los biólogos han estado interesados en realizar estudios en tejidos en tres dimensiones, de los que se obtienen mayor más información que las en comparación a las láminas de tejido que se usaban hasta el momento. para estudiar los constituyentes de las células y los procesos que ocurren en los tejidos biológicos. El desarrollo de técnicas microscópicas ha venido a corroborar que pueden usarse muestras de tejidos con mayor profundidad, siempre que la luz pueda pasar a través de los mismos ya que cualquier molécula del tejido que absorba o emita luz como la clorofila, la hemoglobina o la melanina, puede causar interferencia en los ensayos.

1. Kit SeeDB (See Deep Brain) [Número de catálogo 291-79601]

El reactivo SeeDB consiste en una solución saturada de fructosa en agua con tioglicerol, el kit se compone de seis botellas de esta solución en la disolución de fructuosa diferentes concentraciones y tres reactivos adicionales: paraformaldehído, 1XPBS (-) y la solución de inmersión recomendada por el fabricante del microscopio. Usando este reactivo se pueden observar los circuitos neuronales teñidos con reactivos fluorecentes, tanto en ratones adultos como en cerebros de ratón en desarrollo. Es compatible con técnicas que requieren microscopios confocales o multifotón. El reactivo se debe mantener a temperaturas menores a 25ºC en la oscuridad hasta su utilización.

2. Reactivo ClearSee™ [Número de catálogo 031-25151]

El reactivo ClearSee™ se usa para aclarar tejidos en plantas. Este reactivo tiene la capacidad de disminuir la fluorescencia de la clorofila, intrínseca de los tejidos de plantas, sin afectar la fluorescencia de las proteínas usadas para marcaje. El proceso de aclarado consta de tres pasos, la fijación, el lavado y el aclarado. Las muestras tratadas con ClearSee™ pueden ser almacenadas durante 6 meses, sin perder sus características, y ser observadas en diversas ocasiones, con solo fijarlas con vaselina en un portaobjetos es suficiente para observarlas. Existen casos, como el de la planta de arroz, en que es necesario un tratamiento previo para eliminar la cera cuticular lo cual permite la entrada del reactivo sin dificultad.

3. SCALEVIEW - A2 [Número de catálogo 193-18455]

El reactivo SCALEVIEW - A2 es una mezcla de urea, glicerol y Triton-100 desarrollada para provocar que los tejidos se vuelvan transparentes al ser sumergidos en la disolución. solo con ser empapados en esta sustancia. Por ejemplo, para hacer láminas delgadas de 2 mm transparentes solo son necesarias 2 semanas. Entre las ventajas que tiene de la utilización de SCALEVIEW-A2 se destacan su capacidad para eliminar la opacidad de los tejidos y con ello lograr imágenes de mayor definición. Su uso es compatible con el de proteínas fluorescentes que se usan para el marcaje celular y que con microscopios multifotónicos permite obtener imágenes en tejidos sin tratar a una profundidad mayor que la lograda con otras técnicas.

Para muestras tratadas con SCALEVIEW-A2 se recomienda el uso de microscopios fluorescentes multifotón (modelo FVMPERS) o confocal (OLYMPUS, modelo: FV3000) y objetivos de la marca OLYMPUS de diferentes modelos, que se pueden consultar en la información técnica que acompaña el producto.

4. VA-044 [Número de catálogo LB-VA044-50gs]

El dihidrocloruro de 2,2'-Azobis[2-(2-imidazolin-2-il) propano (VA-044) permite, mediante la técnica CLARITY, transformar tejidos e incluso órganos en hidrogeles transparentes. Este reactivo actúa como iniciador de reacciones de polimerización, que permite, una vez finalizado el proceso obtener polímeros de alto peso molecular transparentes y en los que se puede estudiar su estructura mediante técnicas ópticas sin ninguna interferencia.

ALGUNOS REACTIVOS QUE DISTRIBUYE FUJUFILM WAKO:

pEBMulti – Vector de expresión génica	Serie de estándares de fructooligosacáridos	Peptidoglicano de Micrococcus luteus