Reactivos fluorescentes para pruebas biológicas
Los reactivos fluorescentes son aquellos que emiten luz después de haber sido excitados con una longitud de onda apropiada, que promueve los electrones a niveles energéticos de mayor energía. El regreso de los electrones a los niveles basales puede producirse con emisión de calor y de fotones, dependiendo de cuanta energía se emite en forma de luz se considera que el compuesto tiene un mayor rendimiento cuántico de fluorescencia. Los avances tecnológicos han permitido la detección de la emisión de luz de diferente frecuencia e intensidad, existiendo hoy en día espectrofluorímetros muy sensibles, así como microscopios, con los que se pueden llevar a cabo investigaciones que arrojan datos significativos de las propiedades químico-físicas de los compuestos en estudio.
La propiedad de fluorescer en la región visible del espectro electromagnético, que tienen determinadas moléculas, ha sido utilizada por los investigadores de los diferentes campos de la biología para múltiples aplicaciones, especialmente aquellos que trabajan en temas de biotecnología, biología molecular y biología celular. Los compuestos fluorescentes son usados para el marcaje de proteínas y otras biomoléculas; para la tinción de tejidos o parte de estos, tanto in vitro como in vivo; como sensores moleculares y en otros tipos de pruebas fluorescentes.
En este artículo describimos algunos reactivos de laboratorio de química que son utilizados como pruebas fluorescentes para estudiar procesos biológicos y que tienen la característica común de ser comercializados exclusivamente por la compañía Wako.
DAMPAQ-22
El reactivo comercializado con el nombre de DAMPAQ-22 es la 3-(2,6-dietil-4-dansilaminofenil)-1-metil-2,4- (1H, 3H)-quinazolinadiona. Con este reactivo fluorescente se puede conocer la localización de la aminopeptidasa sensible a puromicina (PSA), dentro de un organismo. La APS es una neuropeptidasa que es objeto de estudios para esclarecer su relación con la división y muerte celular, así como su papel en las enfermedades inducidas por la proteína Tau, como es el Alzheimer. Esta neuropeptidasa se parece a la aminopeptidasa N y tiene en común algunos receptores e inhibidores, por lo que las investigaciones apuntan a que sea una molécula con gran importancia fisiológica a nivel neuronal. El DAMPAQ-22 se obtuvo modificando estructuralmente la PAQ-22 [3-(2,6-dietilfenil)-2,4(1H,3H)-quinazolinadiona] que es un inhibidor de la PSA.
BES-Thio
El BES-Thio es un reactivo flourescente que se utiliza para la detección selectiva de grupos tioles y selenoles. Aunque existen otros compuestos que pueden usarse como pruebas fluorescentes para el grupo tiol, en su mayoría se caracterizan por tener una baja hidrofilicidad, lo cual dificulta la detección. Con el uso del BES-Thio, sustancia más hidrofílica, se pueden realizar determinaciones en medio acuoso, sin necesidad de separar el analito del medio, lo que conlleva a reducir el número de pasos necesarios para la detección. Por su mayor solubilidad en agua, el BES-Thio permite medir la actividad de enzimas como la colinesterasa usando aceltiltiocolina o butiriltiocolina como sustratos. Además este reactivo responde a tioles a pH 7,4 y ajustando el pH hasta 5,8 se pueden detectar también los grupos selenoles cuando el azufre de una proteína se sustituye por selenio.
BES-So
El BES-So por su parte se utiliza en la detección de superóxidos, especies de oxígeno reactivo con baja citotoxicidad, con una alta selectividad, mediante una reacción que no es del tipo redox, como en el caso de otros reactivos fluorescentes con los que se suele realizar la detección de superóxidos.
BES-H2O2
Con el BES-H2O2 se lleva a cabo la detección de peróxido de hidrógeno, otra de las especies de oxígeno reactivas que pueden ser generadas por las células. El peróxido de hidrógeno se usa como indicador de diversas patologías y los reactivos fluorescentes usados en su detección tienen baja selectividad. La ventaja del uso del BES-H2O2 es precisamente la alta selectividad que presenta frente a peróxido de hidrógeno, por lo que se puede medir la relación de esta especie tanto con patologías como con otros procesos celulares de una manera fiable usando este reactivo.
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Bibliografía:
1) Kakuta, H., Koiso, Y., Nagasawa, K., Hashimoto, Y., Bioorg. Med. Chemd. Lett., 13, 83-6 (2003).
2) Maeda, H., Katayama, K., Matsuno, H. and Uno, T.: Angew .Chem. Int. Ed., 45, 1810 (2006).
3) Maeda, H., Fukuyasu, Y., Yoshida, S., Fukuda, M. Saeki, K.. Matsuno, H., Yamauchi, Y., Yoshida, K., Hirata, K. and Miyamoto, K.: Angew. Chem. Int. Ed., 43, 2389 (2004).
Otros reactivos que ofrece Wako:
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| Equipo de extracción de ADN SP | Cloruro de oenina con HPLC | Equipo de reactivos SLP |
