Buenas prácticas en el laboratorio de cultivos celulares
El cultivo celular tiene como objetivo mantener gruposde células vivas y funcionales fuera de su ambiente natural. Esto permite estudiar, bajo condiciones controladas, la respuesta de las células a distintos estímulos.
El uso de estastécnicas de cultivo es muy importante en diversas áreas de investigación biológica, como en técnicas para generar células madre pluripotenciales inducidas (iPS) a través de la estimulación de células adultas con distintos factores de transcripción.
Puede leer más acerca de los cultivos celulares en nuestro blog: 4 reactivos de uso en laboratorios de cultivos celulares
El desarrollo y mantenimiento exitoso de una línea celular es un proceso delicado que requiere atención a los detalles y un cuidadoso y riguroso mantenimiento del equipo utilizado. Por ejemplo, existe un constante riesgo de contaminación de los cultivos por microorganismos, que puede prevenirse mediante el manejo adecuado del equipo y material para mantener el ambiente estéril en todo momento.
A fin de prevenir contaminación por microorganismos presentes en el aire, se usan campanas de flujo laminar. Estas deben ser esterilizadas antes de su uso, y es recomendable permitir que el ambiente interior se equilibre al menos por 15 minutos antes de iniciar el trabajo.
Igualmente, es importante asegurar que el ambiente del laboratorio de trabajo sea lo más limpio posible. Por ello, se recomienda limpiar y desinfectar pisos y mesas de trabajo y evitar la acumulación de cajas de cartón y de desechos cerca de las áreas de trabajo.
El equipo que es usado rutinariamente debe ser desinfectado con sustancias apropiadas, como las centrifugas y todos sus accesorios, los baños de agua y las incubadoras. De igual manera, los medios de cultivo, reactivos y material deben ser esterilizados.
Es también importante, para prevenir la contaminación química, que el material sea lavado con sustancias que no dejen residuos tóxicos, y enjuagado con agua bidestilada antes de ser esterilizado. En el caso de medios de cultivo sensibles al calor, pueden ser esterilizados mediante filtración con filtros adecuados (tamaño de poro menor a un cuarto de micra).
En algunas etapas de la obtención de un cultivo celular, es necesario el uso de antibióticos y antimicóticos. Este uso debe ser monitoreado cuidadosamente a fin de evitar el desarrollo de resistencia y modificaciones genéticas en las células cultivadas, así como de enmascarar la posible contaminación de un cultivo.
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Solución de Penicilina-Estreptomicina-Anfotericina B (161-23181)
La estreptomicina es un antibiótico aminoglucósido que inhibe la síntesis de proteínas ribosomales al unirse a la subunidad 30S del ribosoma bacteriano. Inhibe el crecimiento de bacterias tanto Gram positivas como negativas y de actinomicetos.
La penicilina G es un antibiótico betalactámico que inhibe la síntesis de pared celular a nivel de la síntesis de peptidoglicano. Es efectivo contra bacterias Gram positivas y negativas, así como de actinomicetos y leptospira.
La anfotericina B es un antibiótico de tipo macrólido poliénico que daña la pared celular de los microrganismos susceptibles al unirse al ergosterol y formar poros que aumentan la permeabilidad hacia iones. Impide el crecimiento de hongos y algunos parásitos.
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Medio para Congelación de células hiPSCs StemSure (197-17831)
Una vez que se ha logrado el establecimiento de una línea celular, se recomienda generar una reserva de las mismas a fin de permitir el recambio de células cuando estas comiencen a mostrar inestabilidad genética tras cierto número de subcultivos.
El medio StemSure hPSC permite la criopreservación de células iPS humanas, evitando el daño generado por las bajas temperaturas. Al no contener suero ni otros componentes derivados de animales, se evita la posibilidad de contaminación por virus y otros agentes infecciosos.
Bibliografía:
- Martin, B. M. (1994). Tissue culture techniques: an introduction. Springer Science & Business Media.
- Vierck, J. L., Byrne, K., Mir, P. S., & Dodson, M. V. (2000). Ten commandments for preventing contamination of primary cell cultures. Methods in cell science, 22(1), 33-41.
REACTIVOS PARA LABORATORIO DE CULTIVO CELULARES:
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