Aislamiento de exosomas en investigaciones genéticas con kits de reactivos de Wako

Los exosomas se pueden encontrar en diversos fluidos biológicos como la sangre, la saliva o la leche materna. Estas son pequeñas vesículas que contienen proteínas, mARN, microARN, ADN y lípidos en su interior y son secretadas por varios tipos de células. En los exosomas se encuentran también enzimas capaces de degradar los diferentes tipos de ARN, por lo que una de sus funciones consiste en la degradación de este tipo de moléculas. Se ha comprobado que los exosomas participan en la comunicación que tiene lugar entre las células, por lo que son estudiados como mensajeros y como biomarcadores de algunas enfermedades. El uso de los exosomas para aislar biomarcadores de enfermedades difíciles de estudiar como son las enfermedades nerviosas, por la inaccesibilidad al cerebro, o el estudio del cáncer, tiene un futuro prometedor, uno de los retos actuales es conseguir separar estas vesículas extracelulares de manera eficiente para poder usarlas en el estudio de su contenido molecular.

Para la separación de los exosomas se han utilizado convencionalmente métodos como la ultracentrifugación, la precipitación y la purificación por afinidad usando un antígeno de superficie. Los inconvenientes del uso de estos métodos tradicionales son el bajo rendimiento de la separación, la escasa pureza de los exosomas obtenidos y problemas de operabilidad. La empresa Wako, proveedora de reactivos de laboratorio de biología, ofrece un kit para la separación de exosomas llamado MagCapture™ (MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS), el cual basa en un nuevo método de purificación, ya que hace uso de partículas magnéticas y la proteína de afinidad fosfatidilserina. A pesar de que este método se clasifica como un método de afinidad como el método tradicional, se obtienen exosomas con un alto grado de pureza y puede ser usado para separar otras entidades vesiculares de medios de cultivo celulares y de fluidos corporales. La operabilidad del método también mejora con respecto a los tradicionales, pues haciendo uso de una microcentrífuga se obtienen buenos resultados.

Otra ventaja del uso del kit de separación de exosomas MagCapture™ es que las vesículas se obtienen intactas, ya que para ser separadas de las partículas magnéticas con las que se separan se utilizan agentes quelatantes metálicos, trabajando a pH neutro. Los exosomas separados mediante el kit MagCapture™ pueden ser usados en diversas aplicaciones como puede ser el análisis por microscopía electrónica, el análisis granulométrico y el análisis molecular del contenido de las vesículas.

Ventajas del uso del kit para la separación de exosomas MagCapture™:

• Las vesículas son separadas mediante afinidad en la superficie de una membrana de fofatilidilserina.

• Las condiciones para la elución son suaves, no afectan la integridad de las vesículas, se realiza a pH neutro usando un agente quelatante de un ión metálico.

• No se requiere ultracentrifugación y el uso de partículas magnéticas mejora el rendimiento y la calidad del proceso cuando se compara con los métodos tradicionales.

• Se presenta un protocolo optimizado, con el que se logra una gran reproducibilidad.

Para comparar el uso de MagCapture™, para el aislamiento de exosomas con métodos convencionales como son la ultracentrifugación y el método de afinidad a un antígeno de superficie, se realizaron extracciones de suero sanguíneo humano siguiendo las tres técnicas y luego realizando western blot con los anticuerpos: anti CD9, anti CD63 y anti CD81, todos ellos anticuerpos marcadores de exosomas. El aislamiento de exosomas con MagCapture™ produce mejores rendimientos que los obtenidos con ultracentrifugación y con el método de afinidad a un antígeno de superficie. Este estudio demuestra que para los investigadores usar el MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS no solo les reportará beneficios económicos, sino que también podrán obtener vesículas más puras y con mayor rendimiento que con el uso de los métodos convencionales.

En Wako Chemicals, somos desarrolladores y proveedores de reactivos para laboratorio. Si precisa de alguno de los productos mencionados en este artículo, por favor comuníquese con nuestros expertos.

Bibliografía:

1) M. Colombo, G. Raposo, C. Thèry, Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 30, 255–89, 2014.

2) Schilders et al., International review of cytology, 251, 159-208, 2006.

ALGUNOS REACTIVOS DE LABORATORIO DE QUIMICA: