8 reactivos usados para el análisis de proteínas en laboratorios de Biología

El análisis de proteínas se puede considerar lo mismo como algo rutinario en un laboratorio de biología, que como un factor clave en una investigación. La estructura química proteica está presente en las enzimas, receptores y muchas otras biomoléculas. De acuerdo a la forma en que están ordenados los aminoácidos que constituyen una proteína, esta tendrá unas propiedades fisicoquímicas que la caracterizan.

La importancia de las proteínas que forman parte de los sistemas biológicos es indudable. Basta con mencionar, por ejemplo, que la especie humana no existiría sin el aporte de estas sustancias, ya que algunos aminoácidos necesarios para la vida se incorporan en los humanos a través de las proteínas que consumimos en nuestra dieta, pues nuestro organismo es incapaz de sintetizarlos.

Entre los métodos más usados para el análisis de proteínas están los de separación: la electroforesis en gel de acrilamida con dodecil sulfato de sodio, que se conoce por su acrónimo SDS-PAGE (SDS-polyacrylamide gel electrophoresis) donde se separan las proteínas por tamaño, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) y el Western Blotting. Para la identificación de proteínas se usa frecuentemente la Espectrometría de Masas, la Resonancia Magnética Nuclear (RMN) y la degradación de Edman.

En este artículo se comenta la utilidad de algunos reactivos para laboratorio usados en el análisis de proteínas, en los laboratorios de biología dedicados a la investigación científica.

1. 5-carboxifluoresceína [5-FAM]

La 5-carboxifluoresceína es un indicador fluorescente que permite el marcaje de proteínas in situ. Una vez que la proteína es marcada con el colorante orgánico se pueden llevar a cabo análisis espectroscópicos, cromogénicos y fluorogénicos con la molécula así como utilizar el marcaje para visualizar la especie mediante microscopía.

2. Marcadores de peso molecular para usar en electroforesis con tinción con plata

Para la electroforesis de proteínas, pueden usarse los marcadores de peso molecular. Que permiten una tinción uniforme de las proteínas según su peso. En este caso se utilizan marcadores para la SDS-PAGE cuando se selecciona un método de tinción con plata. Los marcadores hacen que la banda correspondiente a cada proteína se reduzca, mejorando la detección.

Wako dispone de 4 tipos de marcadores de peso molecular que cubren todo el rango de pesos donde se encuentran las proteínas analizadas en el laboratorio:

• bajo rango 6.5 – 42 kDa
• rango medio 14 – 79 kDa
• rango alto 16 – 180 kDa
• amplio rango 6.5 – 180 kDa

3. Acrilamida Phos-tag™

El sistema Phos-tag™ está diseñado para el análisis de proteínas fosforiladas. La acrilamida Phos-tag™ se añade cuando se está preparando el gel de la SDS-PAGE para separar las proteínas fosforiladas. La velocidad de migración en el gel de las proteínas fosforiladas disminuye, al estar atrapadas por la acrilamida Phos-tag™, permitiendo la separación de las proteínas no fosforiladas. Este reactivo permite incluso la separación de isoformas fosforiladas en diferentes posiciones, pudiéndose reconocer todas las formas fosforiladas de serina, treonina y tirosina. Las muestras que contienen acrilamida Phos-tag™ pueden usarse para estudios por Espectrometría de Masas y Western blotting.

La serie Phos-tag™ además incluye reactivos como:

• Phos-tag™ Biotina (para la detección específica sin usar anticuerpos anti-fosforilados en western blot).
• Phos-tag™ Agarosa (para el enriquecimiento, separación y purificación de proteínas fosforiladas usando columnas cromatográficas).

4. Buffers para electroforesis con 2-mercaptoetanol

Laemmli Buffers con 2-mercaptoetanol: dos buffers donde varía la relación entre los componentes: TRIS-HCl, glicerol, BPB y el 2-mercaptoetanol.

También Wako distribuye buffers de Laemmli sin 2-mercaptoetanol y con 2-mercapto-1,3-propanodiol, un sustituto del 2-mercaptoetanol con menor toxicidad.

5. Serie de membranas hidrofóbicas ClearTrans™ para Western Blot

ClearTrans™ es la marca con la que Wako comercializa membranas hidrofóbicas para el análisis de proteínas por el método de Western Blot:

• Membrana de difluoruro de vinilideno (PVDF) ClearTrans™. (Estas membranas pueden usarse para la detección por fluorescencia de proteínas, por su alta afinidad con las proteínas. En este caso se trata de membranas con poros de diámetro de 0.2 μm que reducen la permeabilidad a las proteínas de bajo peso molecular).
• Membrana de nitrocelulosa ClearTrans™ (La membrana de nitrocelulosa puede ser usada para transcripciones).
• Membrana de Nylon ClearTrans™ (Membrana de nylon no cargada para análisis de Western Blot).

6. Reactivos ImmunoStar™

Con los reactivos de la marca ImmunoStar™ se puede llevar a cabo la detección de proteínas mediante métodos colorimétricos, en el rango de los picogramos. Además de medir la luminiscencia, se pueden realizar medidas de color y en el UV. El uso de reactivos ImmunoStar™ permite obtener medidas con una alta relación señal/ruido. Wako dispone de reactivos formados por tres componentes que mejoran la calidad de las medidas. La serie ImmunoStar™ tiene además reactivos de dos componentes (el ImmunoStar™ LD de gran sensibilidad y el ImmunoStar™ Zeta que presenta una señal luminiscente estable en el tiempo).

7. Lisil endopeptidasa con pureza para MS

La lisil endopeptidasa, así como la tripsina, se usan como enzimas de digestión para el análisis proteómico. Una vez realizada la digestión de las proteínas se estudian los péptidos obtenidos mediante Espectrometría de Masa, pudiéndose de esta manera identificar la proteína. La lisil endopeptidasa se vende en pequeñas porciones en forma de sólido liofilizado.

8. Di-4-ANEPPS

El reactivo comercializado como Di-4-ANEPPS es la sal de 4-{2-[6-(dibutilamino)-2-naftalenil]etenill}-1-(3-sulfopropil)-hidroxi piridinio. Este compuesto fluoresce, con una longitud de onda de excitación de 496 nm y de emisión de 705 nm. Esta sal es un colorante de tipo estirílico y se usa como prueba molecular en técnicas de microscopía, por ejemplo para estudios del cerebro, entre otras muchas aplicaciones:

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