5 Reactivos para el estudio de las funciones del MicroARN

Se conoce como microARN a las pequeñas cadenas de ARN compuestas por una media de 23 nucleótidos, que participan en la regulación de la expresión de los genes a través de la unión al ARN mensajero.

Los microARN se expresan en una gran cantidad de genes de los organismos de los diferentes reinos, en algunos casos se ha detectado que son cadenas muy antiguas que han permanecido intactas en la evolución, por lo que ejercen una gran influencia en el desarrollo.

Algunos estudios demuestran que hay microARN que solo influyen en el desarrollo del tejido donde se expresan, mientras que otros pueden influir en el desarrollo del embrión como tal y de los diferentes sistemas.

Al ser capaces de regular la expresión de los genes, los microARN pueden tener un papel fundamental en el cáncer. Las investigaciones respecto a este tema han revelado que en muchos casos de cáncer la expresión de los microARN está modificada. Los científicos actualmente estudian cómo influyen los microARN en la modulación de genes involucrados en la formación de tumores, y también en la supresión de los mismos. Las investigaciones con tumores humanos muestran que el perfil de expresión del microARN difiere en los tejidos normales, de aquellos tejidos que provienen de tumores, diferenciándose también para cada tipo de tumor.

La compañía Wako comercializa una serie de reactivos para ser usados en investigaciones relacionadas con el micro RNA. En este artículo comentaremos la utilidad de 5 de estos reactivos.

1. Anticuerpo monoclonal Anti Ago 1 humana y de ratón

Este anticuerpo puede ser usado para la purificación de microARN unido a la proteína Ago1, mediante la técnica de inmunoprecipitación. Se considera que los microARNs al incorporarse en las proteínas del complejo RISC (complejo silenciador inducido por el ARN), son capaces de degradar las cadenas de ARN mensajero o de inhibir su traducción. Las principales componentes del complejo RISC son las proteínas de la subfamilia llamada Argonautas, Ago1 y Ago2. Después de haberse unido a las proteínas Ago1 y Ago2 los microARNs se enlazan a los ARN mensajeros. Al precipitarse los complejos RISC con el anticuerpo monoclonal anti Ago1, se pueden recuperar los microARNs unidos a este complejos y trabajar con ellos en las investigaciones que se estén llevando a cabo.

Las investigaciones en que suelen usarse estos anticuerpos son muy diversas, por ejemplo cuando se está estudiando un ARN mensajero en particular, o para estudios de clonación de células. En biomedicina son muchos los temas que se están abordando desde la perspectiva del papel de las moléculas de microARN que se relacionan con una enfermedad determinada, y puede ser útil también contar con el anticuerpo monoclonal Anti Ago1 que tiene reactividad cruzada tanto con la proteína Ago1 humana como con la de ratón.

2. Anticuerpo Monoclonal Anti PIWIL1

Las proteínas PIWI son otra subfamilia de la familia de proteínas Argonauta. El dominio PIWI de las proteínas Argonauta está presente en células germinales, en todas las eucariotas, por lo que juega un papel fundamental en todas las investigaciones relacionadas con las funciones del microARN, su unión a las proteínas Argonauta y la regulación génica. La subfamilia de proteínas PIWI también se expresa en otros tipos de células madre y en humanos está formada por PIWIL1 (también llamada HIWI), PIWIL2 o HILI, PIWIL3, PIWIL4 o HIWI2. En ratones las PIWI1, 2 y 4 son llamadas MIWI, MILI y MIWI2, respectivamente. El ARN que interacciona con el dominio PIWI se conoce como piARN y tiene un papel importante en la regulación de la diferenciación celular y el desarrollo. El piARN está formado por cadenas de mayor número de nucleótidos que el microARN.

El anticuerpo monoclonal 2C12 se utiliza para la inmunoprecipitación de Hiwi (PIWIL1 humana) y MiWi (PIWIL1 ratón). Además se puede utilizar en la purificación de piARN.

3. Kit de aislamiento de micro ARN unido a la proteína Ago2 humana (microRNA Isolation Kit, Human Ago2)

El microARN unido a la proteína AGO2 humana puede obtenerse por inmunoprecipitación a partir de cultivos de células, utilizando el anticuerpo monoclonal específico para la proteína Ago2 humana. Esta proteína es clave en el papel de los microARN, pues es la proteína que activa la escisión de las cadenas de ARN mensajero diana.

Este kit está diseñado de manera que el precipitado de proteínas obtenido por la técnica de inmunoprecipitación se lava y posteriormente se trata con una disolución que forma parte del kit, la cual es capaz de eludir la proteína Ago2. De esta manera se puede obtener el microARN con una pureza suficiente para ser usado directamente en otras técnicas, que ayudan a la comprensión de los sitios de unión del complejo RISC, los mecanismos de replicación de virus patógenos mediante el análisis genómico de estos y muchos procesos más que están regulados por el microARN a través de su unión a los ARN mensajeros correspondientes. El kit de aislamiento de micro ARN unido a la proteína Ago2 humana ha sido usado con éxito para obtener microARN de muestras de sangre, desde el descubrimiento de microARN en el plasma sanguíneo se han sucedido numerosos estudios para usar estas moléculas como biomarcadores de enfermedades comunes como es el cáncer.

4. Enoxacina V1

La enoxacina V1 es la amida N-terbutil-1-etil-7-(1-piperazinil)-6-fluoro-1,4-dihidro-4-oxo-1,8-naftiridina 3-carboxílica. Esta amida es un análogo sintético de la enoxacina, que es un antibiótico del tipo de las fluoroquinolonas. Se ha comprobado que la enoxacina es capaz de aumentar la producción del microARN que influye en la supresión de tumores. El mecanismo de acción de la enoxacina es a través de la unión a la proteína TAR (proteína de unión al ARN) que participa en la biosíntesis del microARN. Por ello se podrían hallar tratamientos antitumorales a través de la restauración de los niveles normales de microARN.

Con la enoxacina V1 y otros derivados de enoxacina que comercializa Wako se pueden llevar a cabo investigaciones de la inhibición del crecimiento de los diferentes tipos de tumores. Estudiando en cada caso la influencia de estas moléculas en el procesamiento del microARN y observando las consecuencias en el desarrollo de los tumores y en el restablecimiento de los niveles normales de microARN.

5. Kit de clonación de microARN (microRNA Cloning Kit Wako)

En algunas de las investigaciones con el microARN se necesita obtener mayor cantidad de muestra que la aislada de un material biológico en específico. En estos casos se puede usar el kit de clonación de microARN de Wako, con el que a partir de una pequeña fracción de microARN se puede reproducir esta cadena, al obtener el ADN que codifica para la misma clonado. El kit de Wako usa la fosfatasa alcalina de camarón que permite que se obtenga una mejor eficiencia en el proceso de clonación comparado con otros kits que se pueden encontrar en el mercado. Este kit de clonación de microARN permite preparar ADN clonado que codifica para microARN en un día y medio.

INSUMOS DE LABORATORIO PARA EL ESTUDIO DEL MICRORNA

Anti-α-Sinucleína fosforilada	Anti P2X4	Anticuerpo monoclonal Anti-AGO2 humana