5 consejos para elegir la mejor sílica para tu cromatografía
La cromatografía es una técnica de separación que utiliza tanto el tamaño como la distinta afinidad de las moléculas por la dupla fase móvil/fase estacionaria para lograr su separación. En la cromatografía líquida, uno de los materiales más usados como fase estacionaria es el gel de sílica, un polímero de dióxido de silicio.
El gel de sílica se clasifica de acuerdo a su tamaño de partícula en micrómetros (μm). Dado que este es variable, se indica el valor promedio. La sílica de alta calidad tendrá una distribución de tamaño angosta, con poca variabilidad respecto a este valor. Hay también sílica porosa, en que es necesario considerar también el tamaño del poro (diámetro y volumen).
La forma de las partículas debe tenerse en cuenta. Partículas de una forma homogénea (esféricas) resultan en un empacado más uniforme, mejorando la resolución de la separación y la reproducibilidad. La sílica granular, por otra parte, permite obtener buenos resultados y es más económica.
Es posible modificar la sílica químicamente y añadir grupos funcionales de interés para proporcionar distinta selectividad. La sílica tiene grupos hidroxilo con afinidad por los grupos básicos. La amino sílica permite la separación de sustancias altamente polares y fuertemente básicas. Existen también productos sustituidos con cadenas hidrocarbonadas afines a sustancias no polares, a esto se llama cromatografía en fase reversa.
Particularmente para su uso en cromatografía en capa fina, pueden agregarse indicadores a la sílica a fin de facilitar la detección de los analitos. Estos absorben luz UV y emiten luz UV o visible, de manera que los analitos se observan como manchas obscuras.
Con todas estas opciones, para elegir el tipo de sílica más adecuado, debemos de tener en cuenta:
1. El tipo de cromatografía a realizar.
El tipo de sílica a ocupar dependerá del propósito de nuestra cromatografía. Por ejemplo, la cromatografía en capa fina se ocupa para dar seguimiento a una reacción o para probar las condiciones de una separación.
La separación se realiza mediante una cromatografía en columna. Si buscamos acortar los tiempos de análisis, se recomienda usar cromatografía flash. En caso de necesitar limpiar un poco nuestra muestra, se realizaría una cromatografía preparativa. Para ello le ofrecemos:
2. La naturaleza química del analito.
Para lograr la mejor separación posible, necesitamos información sobre la molécula que deseamos purificar. El sistema a elegir dependerá de su solubilidad, y el tipo ideal de sílica cambiará si el analito es ácido, básico o hidrofóbico. De tener macromoléculas (p. ej. péptidos) debe considerarse el tamaño de poro.
Por ejemplo, en Fujifilm Wako contamos con sílica C18, con grupos -amino o -diol:
3. La naturaleza química de las sustancias presentes en la mezcla.
Cuando las demás sustancias presentes en la muestra son muy parecidas al analito podemos plantear el realizar una purificación en dos pasos, elegir la cromatografía flash o seleccionar una sílica químicamente modificada de mayor especificidad.
Por ejemplo, Wakogel® S-1 (230-00261) permite separar fácilmente bifenilos policlorados.
4. La cantidad de muestra con que se trabajará.
Las columnas cromatográficas permiten trabajar con mg e incluso g de muestra. Para cantidades mucho menores ( <100 mg), la separación podría realizarse fácilmente con una placa preparativa: Silicagel 70 F254 PLC Plate-Wako (197-18193).
5. La concentración de la muestra.
Si buscamos una buena separación a concentraciones mayores de analito debemos tratar de aumentar la capacidad de resolución de nuestra cromatografía, ya sea usando cromatografía flash o eligiendo sílica con una mayor área de superficie específica, por ejemplo:
En Fujifilm Wako contamos con una amplia gama de productos para cromatografía de la más alta calidad. Para saber más:
Bibliografía:
Kalász, H., Báthori, M., & Valkó, K. L. (2020). Basis and pharmaceutical applications of thin-layer chromatography. In Handbook of Analytical Separations (Vol. 8, pp. 523-585). Elsevier Science BV.
