4 sistemas útiles en la investigación de proteínas

En los laboratorios de investigación de Biotecnología, Biología molecular, Microbiología y cualquier otra rama biomédica, las moléculas protagonistas de los estudios son en la mayor parte de los casos proteínas, ya que son las estructuras químicas que permiten que ocurran los procesos vitales. Las proteínas actúan como enzimas, receptores, reactivos o cualquier otra función en los organismos vivos, por ello es tan común que sean objeto de estudio. Wako ha desarrollado sistemas que describiremos a continuación para facilitar la síntesis y purificación de proteínas.

DESTACADO: 6 reactivos útiles para el marcaje de proteínas

1. Sistema de síntesis in vitro de proteínas WakoPURE

El sistema WakoPURE, para la síntesis y purificación de proteínas, es un kit que contiene alrededor de 30 enzimas necesarias para la síntesis de proteínas y excepto los ribosomas todos los componentes se encuentran marcados con hexahistidina en el carbono o el nitrógeno terminal. Esta tecnología para la síntesis y purificación de proteínas se ha reconstituido a partir de factores de translación expresados en Escherichia coli. Una vez sintetizada la proteína esta se purifica separándola de los ribosomas por ultrafiltración y mediante una resina de afinidad se separan todos los factores marcados con histidina.

Las ventajas del uso de este nuevo sistema para la síntesis de proteínas radican en que no es necesario el uso de marcadores, ya que todos los factores de transcripción ya están marcados y una vez sintetizada la proteína es fácil de purificar. Todo el procedimiento se puede realizar en menos de tres horas, por lo que el ahorro de tiempo es considerable si se compara con otros sistemas de síntesis de proteínas. El proceso se realiza en tres pasos, la síntesis, la cromatografía de afinidad y la ultrafiltración, requiriéndose solo unos minutos para la manipulación y dos horas para la incubación y purificación.

2. Quick-CBB PLUS, gel de tinción para la técnica de electroforesis bidimensional en gel SDS-PAGE

Quick-CBB PLUS es un bote que contiene un kit para la tinción simple y rápida de las proteínas que van a ser separadas mediante la electroforesis en gel de poliacrilamida. En comparación con el procedimiento convencional QuickCBB, este sistema tiene como ventaja que no requiere procedimientos de fijación y se elimina el uso de disolventes orgánicos como el ácido acético o el metanol. Además como todos los reactivos están ya mezclados en un bote no hay que realizar ninguna mezcla, solo se realizan dos lavados con el gel de lavado, en agua desionizada, la tinción añadiendo el QuickCBB PLUS y por último se lava el gel con agua desionizada.

3. Kits de tinción con plata (Silver Stain MS Kit y Negative Gel Stain MS Kit) para la investigación en proteómica

El Silver Stain MS Kit se utiliza para la secuenciación por Espectrometría de Masas de las proteínas separadas por electroforesis en gel de poliacrilamida. Gracias al proceso de tinción con plata, rara vez la proteína es modificada químicamente al no ser necesario el paso del tratamiento con glutaraldehído y puede detectarse en cantidades tan pequeñas como nanogramos de proteínas.

En el caso del Negative Gel Stain MS Kit lo que se logra es que las bandas de proteínas que pueden permanecer enmascaradas por el color lechoso que contiene el reactivo de tinción de zinc con imidazol, puedan ser detectadas. Este kit contiene otro derivado de imidazol que permite la identificación de las bandas, ya que se observan de manera clara durante un mínimo de 10 minutos. Esto permite la purificación de la proteína cuando se requiere realizar este proceso.

4. Matriz ultrapura para el análisis protéomico por MALDI-TOFMS

Las matrices ultrapuras para el análisis protéomico por Espectrometría de Masa (MALDI-TOFMS) que se encuentran disponibles en Wako son del ácido a-ciano-4-hidroxicinámico [CHCA], el ácido simáptico [SA] y el ácido 2,5-dihidroxibenzóico. Se mezcla una matriz de alta pureza con la muestra a analizar y se realiza el análisis de la proteína por la técnica conocida como MALDI-TOFMS. Estas matrices permiten una buena caracterización debido al alto grado de pureza que se obtiene por recristalización que hace que el espectro sea más limpio y se puedan leer con facilidad los picos de baja intensidad correspondientes a fragmentaciones que en el caso de espectros con mucho ruido no se detectan.

Bibliografía:

1) Shimizu Y. Inoue A. Tomari Y. Suzuki T. Yokogawa T. Nishikawa K. Ueda T., Nature Biotechnology, 19, 751, 2001.

2) Shevchenko, A., et al., Anal.Chem., 68, 850, 1996.

3) Fernandez-Patron, et al., Anal. Biochem., 224, 263, 1995.

ALGUNOS REACTIVOS PARA INVESTIGACIONES:

Triglicéridos LabAssay	Vector de expresión de proteínas fluorescentes básicas Evrogen	Lysyl Endopeptidase