3 Kits ELISA útiles en la investigación del Alzheimer
Las investigaciones en el campo de la biomedicina revelan los cambios a nivel molecular que ocurren cuando una persona padece una enfermedad. Basándose en estos cambios se seleccionan los marcadores que van a ser utilizados para el diagnóstico de la enfermedad. Luego, mediante diversas técnicas analíticas se pueden realizar mediciones de estos biomarcadores en los diferentes fluidos corporales que son extraídos del paciente.
Una de las técnicas analíticas que se puede utilizar es el ensayo ELISA, ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas. En los ensayos ELISA se hace uso de anticuerpos para determinar la concentración o presencia de péptidos y proteínas, dependiendo de si realiza un ELISA cuantitativo o cualitativo.
La enfermedad de Alzheimer es la demencia más común en la actualidad, por sus características neurodegenerativas provoca que los pacientes que la sufren tengan un deterioro marcado de sus procesos cognitivos, de conducta y memorísticos. Al aumentar la esperanza de vida, fundamentalmente en países desarrollados, hay una gran preocupación por parte de la comunidad científica en estudiar esta enfermedad que tiene una gran incidencia y tiene mayor prevalencia en las personas de edad avanzada. Entre las neuropatologías de esta enfermedad está la degeneración de algunas partes del cerebro como es el lóbulo frontal. Una de las causas de la degeneración neuronal es la acumulación de péptido β-amiloide en forma de placas, también puede deberse a la formación de ovillos neurofibrilares compuestos por la proteína Tau y a la pérdida de neuronas de manera selectiva en los enfermos de Alzheimer.
El péptido β amiloide puede tener un papel primordial en el Alzheimer ya que induce la fosforilación de la proteína Tau, que conlleva a la agregación de la proteína y la formación de ovillos; su interacción con cationes metálicos induce la aparición de radicales libres causantes del estrés oxidativo; provoca un aumento en la permeabilidad de las membranas neuronales y produce afectaciones en las mitocondrias. También puede interaccionar con receptores GABAérgicos y glutaminérgicos afectando las funciones del hipocampo. Las cadenas de este péptido están compuestas por aminoácidos, cuyo número varía entre 36 y 43 aminoácidos, siendo la de 40 la más común. Los diferentes fragmentos solubles de péptido β amiloide como pueden ser el fragmento 1-42 y el 31-35 son los más relacionados con la enfermedad de Alzheimer, según concluyen los estudios científicos.
Los kits ELISA comercializados por Wako para el diagnóstico del Alzheimer miden la concentración del β amiloide de diferentes longitudes de cadena. Las personas que genéticamente están predispuestas a padecer Alzheimer pueden presentar mutaciones en la proteína precursora de amiloide. Estas mutaciones conllevan a que las isoformas 40 y 42 del pétido β amiloide se depositen en forma de placas seniles. Actualmente se llevan a cabo investigaciones con el fin de poder detectar la enfermedad en sus inicios e incluso de llegar a prevenirla. Por ello para los laboratorios de investigación es muy útil contar con herramientas analíticas como son estos kits ELISA.
1. Kit ELISA para la cuantificación del β-amiloide humano (1-40) [Human β Amyloid (1-40)
La isoforma más común del péptido β-amiloide es la cadena de 40 aminoácidos, con este kit se puede realizar la determinación cuantitativa de esta isoforma en plasma sanguíneo, en el líquido cerebrorraquídeo, en un cultivo de tejidos y en tejido homogeneizado humano. Contiene dos anticuerpos específicos, uno para el extremo con N terminal del péptido β-amiloide que se une a cualquier cadena y otro que interacciona con el C terminal del β-amiloide formado por 40 aminoácidos.
2. Kit ELISA para la cuantificación del β-amiloide humano (1-42) [Human β Amyloid (1-42)]
La cadena de β-amiloide formada por 42 aminoácidos forma con más facilidad las placas seniles por sus características estructurales. Mediante este kit se puede calcular la concentración de esta isoforma del péptido β-amiloide en fluidos humanos y muestras de tejidos. Contiene también dos anticuerpos, uno de ellos específico para el β-amiloide de 42 aminoácidos.
3. Kit ELISA para la cuantificación del β-amiloide humano y de rata (40) [Human/Rat βAmyloid(40)]
En el caso de este kit ELISA se pueden cuantificar tanto la cadena de β-amiloide de 40 aminoácidos o aquellas que contienen una parte de la cadena de 40 aminoácidos con el extremo del C intacto. Esto quiere decir que si existen moléculas de péptidos donde la parte de la cadena terminada en N se ha roto o modificado, pero se conserva el extremo C terminal también se podrán cuantificar, para este tipo de cadenas se utiliza el símbolo β-amiloide (x-40).
Para el uso de estos 3 kits solo hay que seguir una serie de pasos sencillos que se describen en el procedimiento que acompaña a los envases. Se adicionan las muestras y los estándares a las placas que se dejan toda la noche incubando en frío. Al otro día se añade la disolución del anticuerpo de reconocimiento del β-amiloide y se dejan reposar las placas en frío durante una hora. Después de incubar nuevamente con el reactivo cromogénico tetrametilbencidina (TMB) se adiciona el anticuerpo específico para el C terminal de la cadena de 40 o 42 aminoácidos marcado con peroxidasa de rábano (HRP). Este protocolo hace de los kits descritos una herramienta sencilla para cualquier laboratorio de investigación que necesite realizar medidas de péptidos β-amiloides. Además Wako cuenta con otros kits para fines similares, algunos de ellos que realizan la detección en muestras con baja abundancia del analito, llamados high sensitive.
