10 reactivos útiles para las investigaciones de ciencia forense

Las investigaciones en ciencia forense abarcan todo lo relacionado a los estudios que se realizan en un cuerpo sin vida. Son muchísimos los datos que los científicos pueden obtener de un organismo muerto, tanto los referidos a las causas de la muerte, como de enfermedades y otros datos útiles para las autoridades de la justicia.

Entre los reactivos que comercializa Wako útiles para investigaciones patológicas o de ciencia forense se encuentran estos 10 que describimos en este artículo.

1. Disolución neutra de formalina en buffer de fosfato

El buffer de formalina es un agente que se utiliza para la fijación de tejidos. Como fijación se entiende el proceso de mantener un tejido intacto, para que cuando sea observado por el microscopio mantenga todas sus características, lo mismo si ha sido obtenido de un organismo vivo o de uno muerto. Usando esta disolución de formalina se logra estabilizar los principales componentes proteicos del tejido y así frenar la autólisis y minimizar la degeneración y la deformación de los componentes del tejido debido a los procesos químicos y al calentamiento a los que se somete para prepararlo para su estudio.

Wako dispone de disolución neutra de formalina en buffer de fosfato de sodio al 10, 15 y 20 % usada muy comúnmente para fijar los tejidos que van a ser observados mediante microscopía electrónica. El buffer de fosfato permite mantener el pH de la disolución alrededor de 7,4. Ejemplos en que puede ser usada la disolución de formalina son: la detección histoquímica de enzimas, hemoglobinas y otras moléculas; la fijación de componentes de los tejidos que no se logran fijar con la formalina común como son los mucopolisacáridos y los glicógenos.

2. Disolución para la deshidratación de tejidos

Para preparar las muestras de tejidos que son usadas en ciencia forense se siguen varios pasos, uno de ellos es deshidratar el tejido para poder proceder a su parafinización posteriormente. El disolvente más utilizado para deshidratar tejidos siempre fue el etanol, pero debido a que este producto ha sufrido subidas de precio muy grandes en algunas épocas para intentar prohibir su consumo recreativo, se han investigado alternativas que puedan usarse con este fin.

La disolución para la deshidratación de tejidos que vende Wako (Tissue Dehydration Solution 99 y Tissue Dehydration Solution 100) no es más que etanol desnaturalizado con muy bajo contenido de agua. El alcohol desnaturalizado es más barato que el común y con el fin de usarse en investigaciones forenses actúa con la misma eficacia que el etanol para la deshidratación de tejidos, siempre que contenga muy poca agua, pues si el tejido está húmedo impide que penetre la parafina en que es embebido con posterioridad.

3. Kalkitox™

El Kalkitox™ es un nuevo tipo de descalcificador que combina las ventajas de la disolución de Plank-Rychlo y de los métodos que usan agentes quelatantes. La descalcificación de las muestras usadas en ciencia forense se realiza para facilitar el tratamiento de tejidos duros como puede ser el de los huesos. El agente descalcificante debe actuar rápidamente, debe ser fácil de usar y no debe causar daños en los tejidos como puede ser la expansión contracción o disolución de los mismos. El Kalkitox cumple con todos estos requisitos como agente descalcificante y además permite que se pueda llevar a cabo la neutralización simultáneamente, se usa a bajas temperaturas (normalmente se recomienda que las muestras sean refrigeradas durante el proceso) y favorece la inmunotinción. Este reactivo está compuesto principalmente por ácido clorhídrico y EDTA.

4. Lemosol®

En la preparación de los tejidos para investigaciones forenses se procede a su deshidratación, antes de la parafinización, como ya hemos comentado anteriormente. Pero el alcohol usado en la deshidratación y la parafina no se mezclan bien, por lo que el alcohol se sustituye por un reactivo llamado intermediario o reactivo de reemplazo. El Lemosol® es un intermediario que tiene entre sus componentes D-(+)-limoneno, una sustancia extraída de la piel de la naranja, que le proporciona un olor muy agradable. El disolvente más usado como intermediario es el xileno, pero este compuesto tiene las desventajas de que es tóxico, muy volátil y tiene un olor bastante desagradable, por lo que utilizar el Lemosol también tiene como ventaja sustituir el xileno o el cloroformo que también es compatible como reactivo de reemplazo.

5. Solución de hematoxilina de Mayer

La solución de Mayer de hematoxilina es la más utilizada para la tinción de tejidos usando este colorante. Con el método de tinción conocido como Hematoxilina-Eosina (HE) se logra que el núcleo de la célula se tiña de azul y el citoplasma de rojo.

6. Toluidina azul

La toluidina azul también se usa para la tinción de tejidos. Uno de los reactivos de laboratorio que ofrece Wako es la toluidina azul en disoluciones a pH 2.5, 4.1 y 7. Con este colorante se puede llevar a cabo la tinción de mucopolisacáridos acídicos presentes en tejidos conectivos como el ácido halurónico o el sulfato de mucoitina presente en los cartílagos.

7. Immunopen

El Immunopen es un lápiz que contiene un reactivo útil para que pueda usarse en inmunotinción. Está diseñado para inducir reacciones inmunológicas y evita el desperdicio de antisueros que se produce con otras técnicas de inmunotinción. Para usar este lápiz para la tinción se debe lavar antes el sitio donde se va a aplicar con agua y no llevar a cabo procesos con disolventes como la acetona pues se disuelve el reactivo. Realizando un círculo con el Inmunopen alrededor de la sección donde se va a proceder a teñir este actúa como una barrera impidiendo el uso innecesario de colorantes usado para la inmunotinción.

8. Kit para la detección in situ de la apoptosis

El kit para la detección de la apoptosis proporcionado por la proveedora de reactivos de biología, Wako, basa su funcionamiento en la técnica de TUNEL para detectar las células apoptóticas. Puede usarse en tejidos embebidos en parafina, los reactivos ya vienen listos para su uso y es sencillo de utilizar.

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9. Immunosaver

El Immunosaver es un reactivo que se usa para recuperar la actividad antigénica que se encuentra enmascarada en los tejidos fijados con formalina. En los tejidos fijados las proteínas se unen mediante puentes metilénicos que impiden el acceso de las moléculas a los sitios activos de los antígenos. La principal ventaja del Immunosaver es que se puede usar con diferentes tipos de proteínas logrando recuperar la actividad como antígeno. También es importante mencionar que después del uso del Immunosaver se logra mayor eficiencia en la inmunotinción.

10. Softmount

Este reactivo es una variante del medio de montaje convencional, con características lipofílicas pero que no contiene xileno. El Softmount se puede diluir con Lemosol para trabajar con la viscosidad que desee el investigador. El Softmount además de reducir la toxicidad comparado con otros medios de montaje que contienen xileno, se seca rápidamente, contiene un antioxidante y un reactivo que absorbe las radiaciones ultravioletas para prevenir el deterioro de las muestras y ofrece mayor transparencia que otros medios.

Bibliografía:

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